反相高效液相色谱法测定清淋冲剂中大黄素和大黄酚的含量

　【关键词】  反相

　摘要：目的建立清淋冲剂中大黄素、大黄酚的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱(RPHPLC)法，检测波长：254 nm。结果大黄素线性范围0.02～0.2 μg(r=0.999 8)，大黄酚线性范围0.05～0.5 μg(r=0.999 9)，平均回收率大黄素98.68％，RSD=1.12％；大黄酚98.44％，RSD=0.98％。结论该方法简便、准确、重现性好，可作为质量检验的一个定量方法。

　关键词：反相高效液相色谱法；清淋冲剂；大黄素；                    

　清淋冲剂为临床常用中成药，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第六册，具有清热泻火，利水通淋的功效。标准中未收载该制剂的含量测定，本实验采用HPLC法同时测定了该制剂中两种蒽醌类成分大黄素、大黄酚的含量，为完善清淋冲剂的质量标准提供了依据。

　 1 仪器与材料

　SSI PC2000高效液相色谱仪，SSI Model 500紫外检测器，ANASTAR色谱工作站。大黄素、大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所)：清淋冲剂(某药厂，3个不同批号)；甲醇为色谱纯，水为重蒸去离子水，其余试剂为分析纯。

　 2 方法与结果

　2.1 色谱条件色谱柱：Lichrospher C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流动相：甲醇0.1％磷酸(85∶15)，检测波长254 nm，柱温：30℃，流速1.0 ml/min。

　2.2 对照品溶液的制备分别精密称取大黄素、大黄酚对照品适量，加无水乙醇醋酸乙酯(2∶1)制成每1 ml含大黄素0.0l mg，大黄酚0.025 mg的混合溶液，即得。

　2.3 供试品溶液的制备取清淋冲剂2 g，精密称定，加乙醇25 ml，超声处理20 min  用乙醇补足损失的重量，滤过，精密量取续滤液10 ml，置烧瓶中，水浴蒸干，加30％乙醇盐酸(10∶1)溶液15 m1，置水浴中加热水解1 h,立即冷却，用氯仿强烈振摇提取4次，15 ml/次，合并氯仿液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇醋酸乙酯(2∶1)溶解，移置25 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

　2.4 阴性对照液的制备按处方比例及生产制备方法，自制不含大黄药材的阴性样品，然后按供试品溶液的制备方法，制备阴性空白对照溶液。

　2.5 空白干扰实验分别吸取供试品溶液、阴性空白对照溶液、对照品溶液，按上述色谱条件分别进样测定，结果阴性空白对照溶液在大黄素峰、大黄酚峰相应的保留时间无干扰。

　2.6 线性关系考察精密称取大黄素、大黄酚对照品混合溶液分别进样2.0，5.0，10.0，15.0，20.0 μl在上述色谱条件下进行检测，测定大黄素、大黄酚峰面积，以峰面积积分值Y为纵坐标，对照品进样量X为横坐标，经线性回归分析，得大黄素的回归方程为：Y=3 238 187.5X-71 452.9，r=0.999 8；大黄酚的回归方程为：Y=4 375 350X-423 472.4，r=0.999 9。结果表明：大黄素进样量在0.02～0.2 μg，大黄酚进样量在0.05～0.5 μg范围内，呈良好的线性关系。

　2.7 精密度实验精密吸取对照品溶液20.0 μl，在上述色谱条件下，连续进样5次，结果峰面积大黄素RSD=0.85％，大黄酚RSD=0.79％。

　2.8 稳定性实验精密吸取对照晶溶液，每隔1 h进样量20 μl，重复5次，结果对照品溶液在5 h内吸收面积基本无变化，RSD为0.94％。

　2.9 重现性实验取同一批样品5份，分别按样品测定法测定，结果以含量计算，大黄素RSD=0.89％，大黄酚RSD=0.95％。

　2.10 加样回收率实验精密称取样品细粉适量，分别精密加入大黄素、大黄酚对照品溶液适量，按供试品溶液的制备及含量测定的方法进行，结果平均回收率为：大黄素98.68％，RSD=1.12％；大黄酚98.44％，RSD=0.98％。

　2.11 样品含量测定取3个批号样品，分别按供试品溶液的制备方法处理。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入HPLC仪，在上述色谱条件下测定大黄素、大黄酚含量。结果见表1。表1  清淋冲剂中大黄素、大黄酚的含量（略）

　 3 讨论

　大黄为方中主药之一，其中大黄素、大黄酚等大黄蒽醌类成分为其主要活性成分，《中国药典》2000年版Ⅰ部 “大黄”项下已对大黄素、大黄酚的总量做了规定，规定药材中其总量不得少于0.50％［1］，本实验采用HPLC法测定清淋冲剂中大黄素、大黄酚的含量，方法简便，准确，重现性好，可作为质量检验的一个定量方法。

　 参考文献：

　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：354.