大孔吸附树脂法纯化黄芪皂苷
作者：刘莉，徐雅娟，徐东铭，齐滨
【摘要】 目的：研究大孔吸附树脂法纯化黄芪皂苷类成分条件及参数，比较不同型号树脂测定的皂苷的含量。方法：利用大孔吸附树脂法纯化黄芪皂苷，利用比色法进行黄芪皂苷测定。结果：总提取物中皂苷含量分别为84.6%，用D104树脂得到的皂苷含量较高。结论：此法能较好地分离纯化黄芪总皂苷，可适用于工业化生产。
【关键词】 黄芪；黄芪皂苷/分离提取；复合树脂类
黄芪皂苷是中药黄芪的主要有效成分之一，药理研究证明黄芪皂苷具有消炎、降血压、抗心肌缺氧、中枢镇痛及影响血清和肝脏蛋白质的合成等作用。大孔吸附树脂在中药有效成分精制纯化中的应用逐年增加，在中草药化学成分的分离、富集中的应用也越来越受到人们的重视［1］。
1 实验材料
1.1 药品与试剂 黄芪药材(内蒙)，黄芪皂苷对照品(中国药品生物制品检定所)，D101型、DM401型、D104型大孔吸附树脂(均购自上海树脂厂)，乙醇、硫酸、香草醛等均为国产分析纯。
1.2 仪器 JJ1型定时电动搅拌器(上海申顺科技有限公司)，ESJ1804电子天平(沈阳龙腾电子称量仪器有限公司)，ZFQ85A型旋转蒸发器(上海申顺科技有限公司)，OPI4型UV250紫外可见分光光度计(日本岛津)，数控恒温浴锅(上海申顺科技有限公司)。
2 实验方法
2.1 树脂的预处理和装柱 称取D104大孔吸附树脂一定量，用95%乙醇浸泡24 h后装柱，然后用95%的乙醇反复洗脱，洗至洗脱液与水(1：2)混合不产生混浊，再用水反复洗脱，至洗脱液无乙醇味，并且树脂柱不再下降时即可。
2.2 黄芪样品液的制备 称取黄芪药材粗粉1 kg，用70%的乙醇回流提取2次(150 min，120 min)，提取液合并过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水适量，静置，滤过，定容至1000 mL，得黄芪样品液(1 g生药·mL-1 )［2］。
2.3 大孔吸附树脂法 精密量取黄芪提取液10 mL(1 g生药·mL-1)，加到已经预处理的D104树脂柱(14 mm×200 mm，树脂高度100 mm)上，流速为0.6 mL·min-1，上样完毕后，用蒸馏水洗至流出液无色，再用95％乙醇洗脱，收集洗脱液至流出液无色为止，浓缩并定容至100 mL(0.1 g生药·mL-1)［3］。
2.4 黄芪皂苷含量测定 称取5 mg黄芪皂苷对照，用无水乙醇溶解并定容至10 mL，分别吸取0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL，并用无水乙醇补足体积至0.5 mL，再分别加入8％的香草醛无水乙醇试液0.5 mL摇匀，置水浴中加入体积分数为72％的硫酸5.0 mL摇匀，立即放入62℃恒温水浴中，保温30 min，迅速取出置冷水浴中20 min，在40 min内，于波长540 nm处测定吸光度，随行试剂空白，以黄芪皂苷的质量B(mg)为横坐标，以吸光度A(ABS)为纵坐标，可得回归方程为：Y=1.498X+0.1307(r=0.9997)。结果表明，黄芪皂苷在(0.1-0.5) mg·mL-1的浓度范围内呈良好的线性关系［4］。
2.5 总提取物测定 精密量取上述试验样品10 mL，置干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置110℃干燥2 h，置干燥器中冷却1 h，迅速称重［5］。
2.6 对比实验 精密量取黄芪提取液10 mL(1 g生药·mL-1)，加到已经前处理的D101树脂柱和DM401树脂柱上，重复实验2.3和2.5。比较不同型号树脂黄芪皂苷的含量。
3 实验结果
大孔树脂法总提取物得率和总提取物中黄芪皂苷含量在不同型号的树脂柱上是不同的，结果见表1。表1 不同型号树脂结果比较
4 小结
研究中发现大孔吸附树脂法纯化所得黄芪皂苷的含量在不同型号的树脂上是不同的，其中以D104大孔树脂最适宜，所得黄芪皂苷含量最大。笔者还对树脂的回收进行了初步研究，发现随着周期的增加，树脂吸附容量减小，黄芪皂苷的纯度和收率均呈下降趋势，当使用至第5-6周期后，其纯度下降很快。所以一般树脂重复使用4次以后应对树脂进行再生［6］。随着吸附、洗脱次数的增加，残留在树脂上而不能被洗脱下来杂质会增加，使吸附力减弱，因此使用一段时间，必须对树脂进行再生处理［7］。
【参考文献】
［1］韩鲁佳,阎鲁佳,江正强,等.黄芪多糖及皂苷提取工艺研究［J］.农业工程学报,2000,16(5):118121.
［2］马晓丰,田晓明,陈英杰,等.蒙古黄芪中黄酮类成分的研究［J］.中成药,2005,36(9):12931296.
［3］周跃华,吴笑如,徐德生,等.大孔吸附树脂纯化麦冬总皂苷的工艺研究［J］.中草药,2003,34(12):10891091.
［4］贾晓斌,陈 彦,蔡宝昌,等.黄芪皂苷纯化工艺研究［J］.中成药,2003,25(11):866868.
［5］吴永平,徐永梅,曹 园,等.HPLCELSD法测定黄芪提取物中黄芪甲苷的含量［J］.中成药,2001,23(9):673674.
［6］江正强,韩鲁佳,阎巧娟,等.树脂吸附法提取黄芪皂苷［J］.中国农业大学学报,2000,5(6):6668.
［7］Han L J,Yan Q J,Jian Z Q,et al.Study on extracting technology of astragalan polysaccharide and astragaloside［J］.Transact Chinsoci Agriceng,2000,16(5):118121.