中药血清药理学研究方法应用现状及展望_药学论文

    【摘要】  近年来中药血清药理学研究取得了可喜的成绩,随着中药血清药理学所存在的问题的逐步解决、方法更进一步的成熟和完善,它将更广泛地应用于:(1)复方药物的评价,具有直接的、快速的、敏感的、准确的作用等特点;(2)复方药物的机制研究,血清药理学是复方药物的机制研究主要研究方法之一,随着分析手段的的完善,复方药物中有效成分的逐步确认,其药理学机制也终将被揭开;(3)老年痴呆等慢性病及微生物学、分子学、药理学和生理学、免疫学等学科的研究。
    【关键词】  血清药理学;研究方法;综述
    中药血清药理学是近年来逐渐发展起来的研究中药药效较为科学的一种方法。它是由日本学者田代真一于1988年首次提出的,该方法就是将动物灌服给予中药或复方制剂后,在一定时间采集血液、分离血清进行体外药效实验。1990年,姜廷良教授将它引入我国,之后国内许多学者和专家进行了大量的研究工作,取得了可喜的成绩,积累了一定的经验,为中药作用机制和物质基础的深入研究奠定了基础。我国已将它列入国家自然基金资助范围,现就其研究应用现状作一综述。
    1  中药血清药理学方法在我国的应用现状
    1.1  对中药解热作用的研究  杨奎等[34]研究含黄芩、藿香、羌活胜湿汤和九味羌活汤的血清对单核细胞内dna合成、ca2+内流的影响,发现:含黄芩血清能明显抑制单核细胞内dna合成,抑制ca2+内流,因而能阻止内生致热原的合成;而含藿香、羌活胜湿汤和九味羌活汤的血清对单核细胞的合成的抑制作用依次增强,含香薷血清呈明显量效递增性抑制作用,含羌活胜湿汤和九味羌活汤的血清两者在大剂量时却呈促进作用;对单核细胞内流的影响,香薷的作用较九味羌活汤弱,但均呈量效递增性抑制作用,而羌活胜湿汤则与此相反,在较大剂量时翻转为促进ca2+内流作用;时效关系表明,九味羌活丸对内流的抑制作用在给药后90min达高峰,对dna合成的抑制作用在给药后30min和90min间较明显,对蛋白质合成的影响在给药后120min内呈轻微促进作用。该实验表明采用中药血清药理学方法进行中药时效关系研究,有较大的优势。
    1.2  对中药抗肿瘤作用的研究  杨振江等研究表明:含髓清丸中剂量组和高剂量组血清活细胞百分率均较对照组低,od值明显低于对照组,中剂量组和高剂量组细胞毒活性均大于20%,高剂量含药血清组g1期dna含量明显低于对照组,中剂量组凋亡细胞百分率较高。髓清丸能抑制hel细胞的增殖,并有一定的诱导hel细胞分化、凋亡的作用。张建军等研究发现:富硒绿茶药物血清对人肝癌细胞株能抑制生长,抑制克隆,减少afp和γ睪t的合成和分泌,促进alb的合成,且呈现一定的浓度、时间依赖关系,对人肝癌细胞株恶性表型有逆转作用,可诱导癌细胞向正常方向分化。王力倩[7]等应用中药血清药理学方法观察了含苦参、仙鹤草的血清及其煎剂对肿瘤细胞体外生长的影响,结果发现,除含仙鹤草血清外,其余都可明显抑制s180细胞的生长。初步证明苦参对肿瘤细胞体外生长确有细胞毒作用,而含仙鹤草血清与其煎剂出现了不同的实验结果,可能与中药粗颗粒制剂干扰因素或与动物体内代谢过程及血清影响有关。
    1.3  对呼吸系统的作用的研究  小柴胡汤:研究发现,小柴胡汤浓缩液直接加入到细胞培养基中有致有丝分裂作用,而用小柴胡汤的血清则无此作用。小柴胡汤的致有丝分裂作用,可能是由一些不能从胃肠道吸收的大分子物质产生,或因有效成分经消化道或肝脏代谢失效所致。小青龙汤:黄坚[8]等法研究发现,服用小青龙汤煎剂的豚鼠血清,具有显着抗组织胺引起的离体豚鼠气管平滑肌收缩作用,且呈良好的量效关系,与用煎剂直接进行的离体药理实验的药理效应相似。
    1.4  对心血管系统的作用研究  邱幸生等[9]通过实验表明:益气通络方低、中、高剂量含药血清处理组心肌细胞bcl2阳性表达比例均较单纯缺氧再给氧组(h-r组)有显着增高,提示bcl2具有保护心肌细胞的作用。隋因[10]等观察灌胃给予红花提取物的家兔的含药血清对豚鼠离体的心脏的作用,发现灌胃给予红花提取物5、10、20g-1后,含药血清均能显着增加豚鼠离体心脏冠脉流量,增强心搏幅度及减慢心率。并在灌胃给予红花提取物后60min所采血清的指纹谱中出现一些新的峰。陈长勋[11]等采用中药血清药理学方法观察了附子对离体豚鼠左心房收缩力的影响,结果发现,口服附子粗颗粒制剂后的动物血清与未服药的动物血清比较,具有明显增强心肌收缩力和加快心肌收缩速度的作用,且于给药后2h血清作用达到高峰,从而证明附子强心有效成分能经胃肠道吸收入血,且不会一经吸收而失活,说明附子口服有效。张群豪[12]等研究表明:血府逐瘀煎剂浓缩液和含药血清对实验性动脉粥样硬化家兔主动脉平滑肌细胞(smc)增殖有抑制作用,并呈剂量依赖性,且煎剂浓缩液作用强于含药血清,而空白血清则无此作用,该实验为血府逐瘀的临床应用提供了依据。
    1.5  对免疫功能的影响作用的研究  梁春敏[13]等研究发现:玉屏风散试验血清在灌胃后30min~2h时对小鼠脾淋巴细胞增殖、小鼠il2产生均有明显促进作用,其中以1h时作用最强,1h时对小鼠免疫功能有显着增强作用。曾南[14]等观察了灌服雪莲虫草精大鼠的抗凝血对nk细胞活性的影响。结果表明给药物抗凝血可明显增强nk细胞活性,给药动物血清1.25g/kg剂量组能增强il-2活性,但7.5g/kg剂量组作用不明显,而3.75g/kg剂量组则出现抑制作用,这可能与血清的稀释度与内容物有关。
    1.6  对中药抗菌作用的研究  杨奎[15]等应用中药血清药理学方法进行了中药体外抗菌实验,发现含藿香正气水、藿香正气液及黄芩的血清分别具有明显的抑菌作用,抑菌率在70%以上。该研究发现:一些含中药血清却表现为促进细菌繁殖作用;同时中药复方、单味中药均可出现多个抑菌高峰,提示中药抗菌成分复杂,其吸收高峰时间不一致,有利于抑制细菌繁殖。这说明中药血清药理学可用于检测或反映中药不良反应。
    1.7  对中药抗炎的作用的研究  研究中药赤芍、黄连、牡丹皮、生姜、黄精、黄芩对花生四烯酸生物转化的影响时发现,含黄连、赤芍的血清可抑制花生四烯酸的转化,而其煎剂则无此作用。与此相反,生姜、牡丹皮、黄芩、黄精煎剂有抑制作用,而其含药血清则无效。
    1.8  对骨骼系统的作用的研究  韩立民[16]等以淫羊藿给大鼠灌胃和肌注连续7天,末次给药90min后股动脉无菌取血灭活、进行成骨细胞(ob)培养。研究表明:服淫羊藿后的大鼠血清碱性磷酸酶活性显着增高,细胞内蛋白质含量增高,成骨细胞的数量增多,培养基中钙含量明显降低,剂量与作用呈正相关性,表明该药是抗骨疏松症的理想药物之一。任光友[17]等用血清药理学方法,在新生大鼠头骨成骨细胞培养液中,分别加入不同浓度的老年大鼠含羊蓝合剂(ylm)血清,结果发现中、高剂量组含羊蓝合剂(ylm)血清对成骨细胞增殖率、成骨细胞alp活性、成骨细胞bgp分泌,均有明显增长作用,说明老年大鼠含ylm血清对成骨细胞的增殖和分化功能具有增强作用。
    1.9  对中枢神经系统作用的研究  李翠屏等[18]用daniel方法建立神经元缺氧凋亡模型,加入益气通络方药物血清,应用碘化丙啶采染色法经流式细胞仪检测神经元凋亡率,分光光度法检测mda、no浓度,免疫组化法检测bcl2表达,研究表明:益气通络方能显着抑制缺氧导致的神经元凋亡,并减少神经元缺氧过程no、ofr的生成,上调bcl-2基因的表达。聂伟[19]等运用血清药理学方法观察六味地黄汤(lw)及其活性组分(ca4、ca4-3)含药血清对原代培养胚胎大鼠海马神经元的保护作用。结果发现:lw及ca4、ca4-3含药血清均可不同程度地提高海马神经元的存活率,并且与稳定线粒体膜电位与其神经保护作用具有密切关系。其作用机制有待进一步深入研究。而老年痴呆患者与中枢能量缺乏、神经元数目减少与其线粒体功能障碍密切相关,提示该方法可用于老年痴呆的研究。
    1.10  对消化系统的作用的研究  刘成海[20]等研究表明,含扶正化瘀方的血清能明显抑制肝贮脂细胞增殖,与药物剂量及血清浓度呈正相关性,而且对贮脂细胞内外胶原也有一定的抑制作用。曹宜[21]等通过观察cc14、d睪ain+lps和bcg+lps诱导小鼠肝损伤茵陈蒿汤醇提物的氯仿、乙酸乙酯萃取部位及剩余乙醇提取物降低alt活性的作用,发现茵陈蒿汤醇提物的氯仿再提取部位的小鼠血清对d睪ain诱导大鼠的原代肝细胞alt活性水平表现出稳定的降低作用。李平[22]等研究发现:软肝冲剂药物血清对传代的hsc增殖有明显抑制作用,能显着抑制hsc分泌tgfβ1,其作用与秋水仙碱相仿,可能是通过抑制细胞dna合成及其有丝分裂,或抑制pdfβ1的产生及其受体表达,阻断其信号传导,减少tgfβ1的分泌,下调i型胶原的基因登录来实现抗肝纤维化的机制的。
    1.11  对生殖系统的作用的研究  夏誉薇[23]等以50例不孕患者作受试对象(中药组40例和西药组10例),利用鸡胚绒毛尿囊膜(cam)模型评价女贞孕育汤的血管生成活性和促进血管生成的作用,结果发现:在中药组和西药组治疗前后卵泡期、排卵前、经前期血清的比较,均有显着性差异。王明军[24]研究发现:用傅氏生化汤的水提浓缩液、水提醇沉物、挥发油、醇提浓缩液分别给小鼠灌胃,在一定时间内取其血清经过灭活后,以各给药组灭活后的灌胃给药血清供试液代替药物供试液,结果表明,水提醇沉物具有促子宫收缩的作用,而且强于离体实验的结果。
    2  中药血清药理学研究方法的优势和存在的问题
    2.1  中药血清药理学研究方法的优势  中药血清药理学是在以往体外实验的基础上加以改进而形成的,即以含药血清代替中药粗提物进行实验,因而它最大的优点是:条件可控性强、揭示药物作用机制较为深入、重复性好、使用材料少、更接近药物在体内环境中产生药效的真实过程等。其主要优势具体如下:(1)采用含药血清培养细胞可直接观察中药的药物学效应,便于应用细胞学和分子学手段,从基因、基因产物、药物受体和酶活性等诸方面阐述药理机制。(2)使现代科学技术与传统医学有了一个可行的切合点,有利于应用现代生命的技术手段和理论揭示中药复方配伍的实质,从而推动中医药的科技进步。(3)便于观察和追踪药物吸收和代谢的过程,消除体外实验各种干扰因素的影响,以便于较为清楚地认识复方药物中主要药物的有效成分及活性部位,为进一步开发药物提供依据。
    2.2  血清药理学研究方法存在的问题  中药血清药理学本身是一门方法学,从它引进到我国到现在只有短短的十多年的时间,因而存在不少有待进一步改进之处:(1)血清学本身是一门方法学,其自身组分的复杂性至今尚未完全清楚,血清本身复杂的成分会影响体外实验的结果,而中药复方组分也是一个未知体系,两个未知体系的叠加使原本复杂的体系更加复杂;而就目前的技术手段,尚不能分析复方血清中所有的单一成分,即无法详尽地比较分析每一单一元素在复方中所起的作用,这无形中限制了中药血清药理学在中药复方中的应用范围。(2)药物血清的制备中,规范动物给药方案和采血时间,确立药物的时效关系和量效关系一直是中药药理研究的焦点。而且由于实验动物种属的不同或种属相同年龄性别的不同,都能引起实验动物对药物敏感程度的差异以及对复方药物中不同组分的吸收、转化、作用靶点的相异,因此实验动物的种属和年龄性别的选择有待规范。(3)在体外培养体系中,不可能添加100%浓度的血清,而且不是所有的中药都通过血液起作用,有的是对消化道直接作用,有的是通过局部起作用,这是血清药理学难以解决的。(4)辨证论治是中医诊断疾病的方法和特点,尽管实验医学已经有人将实验与证型相结合,但在实验学中却往往忽视中医内涵,如何将辨病论治与辨证论治结合是血清药理学需要解决的问题。
    3  对中药血清药理学的展望
    尽管中药血清药理学的应用、方法存在不少问题,但作为一门新兴方法学,它在复方药理学研究中具有不可代替的作用。随着中药血清药理学所存在的问题的逐步解决、方法更进一步的成熟和完善,它将更广泛地应用于:(1)复方药物的评价,具有直接的、快速的、敏感的、准确的作用等特点;(2)复方药物的机制研究,血清药理学是复方药物的机制研究主要研究方法之一,随着分析手段的的完善,复方药物中有效成分的逐步确认,其药理学机制也终将被揭开;(3)老年痴呆等慢性病及微生物学、分子学、药理学和生理学、免疫学等学科的研究。
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