HPLC法测定感冒清热颗粒中葛根素的含量_药学论文
【摘要】 目的 应用hplc法对感冒清热颗粒中葛根素进行含量测定。方法 选用hypersil c18色谱柱(5μm,100mm×4.6mm),甲醇-水(22:78)为流动相,检测波长为250nm,流速为1.0ml/min。结果 线性范围为0.1384~1.384μg(r=0.9997),平均回收率为99.84%,rsd=1.65%。结论 本法简便、灵敏、准确。
【关键词】 hplc 感冒清热颗粒 葛根素
【abstract】 objective to determine content of puerarin in ganmaoqingre granule by hplc.methods hypersil c18(5μm,100×4.6mm)was used,and the meoh-eater(22:78)was served as mobile phase,and it′s flowrate was 1.0ml/min,wave length of determining was 250nm.results the linearity range was within 0.1384~1.384μg(r=0.9997).the average recovery was 99.84%,rsd=1.65%.conclusion this method is simple,sensitive,and accurative.
【key words】 hplc;ganmaoqingre granule;puerarin
感冒清热颗粒由荆芥穗、苦地丁、葛根等11味中药制成,具有疏风散寒、解表清热的功效,用于风寒感冒,头痛发热,恶寒身痛,鼻流清涕,咳嗽咽干。为更好地控制产品质量,本试验选用hplc法对其臣药葛根的有效成分葛根素进行含量测定,结果满意。
1 仪器与试药
agilent 1100高效液相色谱仪:四元梯度泵,二极管阵列检测器,agilent 1100工作站;tp-150型超声波清洗器,ag135电子分析天平;葛根素对照品(110752-200108,供含测用)由中国药品制品检定所提供;感冒清热颗粒由湘中制药有限公司提供;甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 hypersil c18色谱柱(5μm,100mm×4.6mm);流动相:甲醇-水(22:78);检测波长:250nm;柱温:30℃;流速:1.0ml/min。
2.2 溶液的配制 精密称取在五氧化二磷中干燥18h的葛根素对照品0.0692g,置50ml量瓶中,加30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液(0.1384mg/ml)。
取本品适量研细,取约1.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加30%乙醇20ml,称定重量,超声处理30min,取出,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取滤液作为供试品溶液。
按处方比例及生产制备方法,制备不含葛根素的阴性样品,照上述供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。2.3 选择性试验 按上述色谱条件,分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各5μl,注入色谱仪,结果见图1。样品中葛根素峰与杂质峰完全分离,阴性对照无干扰。
2.4 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液(0.1384mg/ml)1、2、4、6、8、10μl进样测定,以葛根素的进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为a=3876.9859c-53.9350,r=0.9997。说明葛根素在0.1384~1.384μg。
2.5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液5μl,重复进样5次,测定其峰面积积分值,结果得rsd=0.78%。
2.6 稳定性试验 分别精密吸取同一供试品溶液10μl,于0、1、2、4、8、24h进样,测定其葛根素峰面积积分值。结果表明,供试品溶液在24h内峰面积积分值基本稳定,rsd=2.12%。
2.7 重复性试验 取同一批号样品5份,分别按上述条件,测定其葛根素含量。结果平均含量为1.346mg/g,rsd=0.83%。
2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(1.346mg/g)约0.5g,共6份,分别精密加入葛根素对照品溶液(0.712mg/ml)0.8、0.8、1.0、1.0、1.2、1.2ml,然后按上述方法制备供试品溶液,并测定其含量,结果平均回收率为99.84%,rsd=1.65%,见表1。表1 回收率试验结果
2.9 样品测定结果 取不同批号的样品1.0g,按2.2项下方法制得供试品溶液,以上述色谱条件测定,以外标法计算样品中葛根素的含量,结果见表2。表2 样品中葛根素含量测定结果
3 讨论
曾试验考察分别用30%乙醇、乙醇和甲醇提取对葛根素含量的影响,结果以30%乙醇为提取溶剂效果最好,其葛根素含量最高。
曾试验考察超声提取时间(10、30、60min)对葛根素含量的影响,结果分别为:1.21、1.28、1.28mg/g。表明样品在超声提取30min后葛根素含量已基本提取完全。
文中葛根素的含量测定,样品处理简单,色谱分离效果良好,精密度高,准确可靠,可用于该制剂的质量控制。
【参考文献】
1 国家药典编委会.中国药典,今年版,北京:工业出版社,2005,一部.
2 梁军,郭卫东,高睿.冠脉宁软胶囊中葛根素含量测定.辽宁中医杂志,2006,(12):1619-1620.
【关键词】 hplc 感冒清热颗粒 葛根素
【abstract】 objective to determine content of puerarin in ganmaoqingre granule by hplc.methods hypersil c18(5μm,100×4.6mm)was used,and the meoh-eater(22:78)was served as mobile phase,and it′s flowrate was 1.0ml/min,wave length of determining was 250nm.results the linearity range was within 0.1384~1.384μg(r=0.9997).the average recovery was 99.84%,rsd=1.65%.conclusion this method is simple,sensitive,and accurative.
【key words】 hplc;ganmaoqingre granule;puerarin
感冒清热颗粒由荆芥穗、苦地丁、葛根等11味中药制成,具有疏风散寒、解表清热的功效,用于风寒感冒,头痛发热,恶寒身痛,鼻流清涕,咳嗽咽干。为更好地控制产品质量,本试验选用hplc法对其臣药葛根的有效成分葛根素进行含量测定,结果满意。
1 仪器与试药
agilent 1100高效液相色谱仪:四元梯度泵,二极管阵列检测器,agilent 1100工作站;tp-150型超声波清洗器,ag135电子分析天平;葛根素对照品(110752-200108,供含测用)由中国药品制品检定所提供;感冒清热颗粒由湘中制药有限公司提供;甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 hypersil c18色谱柱(5μm,100mm×4.6mm);流动相:甲醇-水(22:78);检测波长:250nm;柱温:30℃;流速:1.0ml/min。
2.2 溶液的配制 精密称取在五氧化二磷中干燥18h的葛根素对照品0.0692g,置50ml量瓶中,加30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液(0.1384mg/ml)。
取本品适量研细,取约1.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加30%乙醇20ml,称定重量,超声处理30min,取出,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取滤液作为供试品溶液。
按处方比例及生产制备方法,制备不含葛根素的阴性样品,照上述供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。2.3 选择性试验 按上述色谱条件,分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各5μl,注入色谱仪,结果见图1。样品中葛根素峰与杂质峰完全分离,阴性对照无干扰。
2.4 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液(0.1384mg/ml)1、2、4、6、8、10μl进样测定,以葛根素的进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为a=3876.9859c-53.9350,r=0.9997。说明葛根素在0.1384~1.384μg。
2.5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液5μl,重复进样5次,测定其峰面积积分值,结果得rsd=0.78%。
2.6 稳定性试验 分别精密吸取同一供试品溶液10μl,于0、1、2、4、8、24h进样,测定其葛根素峰面积积分值。结果表明,供试品溶液在24h内峰面积积分值基本稳定,rsd=2.12%。
2.7 重复性试验 取同一批号样品5份,分别按上述条件,测定其葛根素含量。结果平均含量为1.346mg/g,rsd=0.83%。
2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(1.346mg/g)约0.5g,共6份,分别精密加入葛根素对照品溶液(0.712mg/ml)0.8、0.8、1.0、1.0、1.2、1.2ml,然后按上述方法制备供试品溶液,并测定其含量,结果平均回收率为99.84%,rsd=1.65%,见表1。表1 回收率试验结果
2.9 样品测定结果 取不同批号的样品1.0g,按2.2项下方法制得供试品溶液,以上述色谱条件测定,以外标法计算样品中葛根素的含量,结果见表2。表2 样品中葛根素含量测定结果
3 讨论
曾试验考察分别用30%乙醇、乙醇和甲醇提取对葛根素含量的影响,结果以30%乙醇为提取溶剂效果最好,其葛根素含量最高。
曾试验考察超声提取时间(10、30、60min)对葛根素含量的影响,结果分别为:1.21、1.28、1.28mg/g。表明样品在超声提取30min后葛根素含量已基本提取完全。
文中葛根素的含量测定,样品处理简单,色谱分离效果良好,精密度高,准确可靠,可用于该制剂的质量控制。
【参考文献】
1 国家药典编委会.中国药典,今年版,北京:工业出版社,2005,一部.
2 梁军,郭卫东,高睿.冠脉宁软胶囊中葛根素含量测定.辽宁中医杂志,2006,(12):1619-1620.