探索大鼠AA对金铁锁总皂苷抗炎作用的反应性_药学论文
【摘要】 目的 通过实验观察和探讨金铁锁总皂苷(tspt)抗炎作用及其作用机理。方法 建立佐剂性关节炎(aa)动物模型,通过观察tspt对aa大鼠足肿胀及炎性组织液中丙二醛(mda)水平的影响来探讨其抗炎作用及其作用机制。结果 tspt能有效抑制aa大鼠足肿胀,降低炎性组织液中mda的水平。结论 tspt具有良好的抗炎作用,其作用机制与降低mda水平有关。
【关键词】 金铁锁总皂苷 佐剂性关节炎 mda
【abstract】 objective to observe the anti-inflammation effects and possible mechanism of total saponins of psammosilene tunicoids (tspt) .methods after establishing aa rats model, the tspt's anti-inflammatory effects and mechanism against aa was studied through observing changes of the ankle swelling and contents of mda in inflammatory-tissue soak of aa rats.results tspt could inhibit articular swelling and effectively decrease the content of mda in inflammatory tissue soak of aa rats.conclusion tspt has good anti-inflammation effects and the mechanism is likely related to tspt's down-regulation of mda.
【key words】 tspt aa mda
金铁锁(苗语:jenb tieeg sox)系苗族习用药材,首载于《滇南本草》,为石竹科植物金铁锁psammosilene tunicoides.w.c.wu et c.y.wu的干燥根。别名:独定子、对叶七、白马分鬃等,主要含皂苷类成分。具有散瘀定痛、止血、消痈排脓之功,用于跌打损伤,风湿痛、胃痛、创伤出血等的治疗。目前尚关于其抗aa研究的文献报道,本文就关于金铁锁总皂苷抗aa作用的研究作一介绍。
1 材料与方法
1.1 材料 freund's完全佐剂(sigma公司产品,由帮定技术公司提供),注射器(1.0ml),金铁锁总皂苷(贵阳中医学院制剂教研室提取),地塞米松注射液(批号:0206101,天津金辉氨基酸有限公司提供),风湿宁注射液(批号504002,罗浮山药业提供),tspt(贵阳中医学院制剂教研室提取)。
动物:70只雄性wistar大鼠,体重:(200±30)g,清洁级二级动物(由军事医学院动物中心提供)。
1.2 实验方法
1.2.1 分组 70只wistar雄性大鼠,随机分为7个组。分别为:生理盐水组(ns)、模型组(a)、西药阳性对照组(地塞米松注射液)(b)、中药阳性对照组(风湿宁注射液)(c)、tspt大(d)、中(e)、小(f)剂量组。
1.2.2 造模 除ns组外,其余各组于每只大鼠右后足跖皮内注射freund's完全佐剂0.1ml致炎。第1天记录大鼠的体重和两侧脚踝关节的周长。
1.2.3 给药 除ns组外,其余均按上述方法造模,于造模后第9天开始给药,连续给药12天。每隔3天,记录各组大鼠体重,及踝关节肿胀,末次给药(造模后第21天)1h后处死大鼠,观察药物对继发性病变的影响。
2 结果
2.1 tspt 对aa大鼠足肿胀的影响 足肿胀的测量方法:用记号笔标记肿胀踝关节周径,每日以特制软皮尺测量踝关节周长(软皮尺无弹性,最小刻度为0.1cm)。实验结果见表1。
统计结果分析:实验结果表明,与生理盐水比较,造模后第8天(药前)各组足均明显肿胀(p<0.01),表明造模成功。用药约1周后,tspt大、中剂量对足肿胀均显示出明显的抑制作用(p<0.01),作用强度大于中药阳性组(风湿宁注射液),接近地塞米松组。提示:tspt能有效抑制aa大鼠踝关节的炎症反应。
2.2 大鼠致炎足中丙二醛(mda)生成量的测定 动物造模分组给药同上。鼠致炎21天后处死,在致炎侧关节上方0.5cm处摘取肿胀足爪,纵向切开,放入5ml生理盐水的试管中4 ℃浸泡过夜,离心(3000r/min)取上清液,-20℃保存待测。
试剂与仪器:mda试剂盒(由北京帮定技术公司提供),可见分光光度计(岛津:fw/uv265)(由北京武警总医院制剂科提供)、恒温水浴锅、离心机(由北京武警总医院检验科提供)。
测定方法及参数:硫代巴比妥酸结合法,于532nm处测定,实验操作方法严格按照试剂盒说明进行。
2.3 统计学方法 实验结果以(x±s)表示,采用t检验。如表2。
表1 tspt对aa大鼠足肿胀的影响 (n=10, x±s)
注:与ns组比较:***p<0.01;与模型组(a组)比较:★★p<0.05,★★★p<0.01;与西阳组比较(b):△△p<0.05,△△△p<0.01。与中阳(c)组比较:※※p<0.05,※※※p<0.01
表2 tspt对aa大鼠炎性组织液中mda的影响 (n=6,x±s)
注:与ns组比较:**p<0.05;***p<0.01; 与模型组(a)比较:★★p<0.05,★★★p<0.01; 与西阳组比较(b):△△p<0.05,△△△p<0.01;与中阳组比较:※※p<0.05
图1 tspt对mda水平的影响图
由图表统计分析可知:与ns组比较,模型组炎性组织液中,mda的含量显着升高(p<0.01),这显示出aa大鼠出现严重的炎性反应。经治疗后,与模型组比较,各个给药组aa大鼠炎性组织液中mda含量均有不同程度的降低,b(西阳组)、d(tspt大剂量组)表现出差异有非常显着性(p<0.01)。
3 讨论
mda通过酶系统和非酶系统产生氧自由基,自由基可引起脂质过氧化,影响一些基因的表达,在炎症和免疫过程中起着中介作用。因此自由基在体系中的作用正受到广泛重视。在正常情况下,机体内仅产生少量氧自由基,其产生、利用和清除保持一种动态平衡。一旦由于某种原因造成体内自由基的堆积,便会损伤组织细胞,导致各种病理变化。
aa大鼠炎症反应中,模型对照组炎性组织液中mda含量显着升高与aa大鼠足肿胀呈正相关,表明致炎因子使机体产生过量的氧自由基。这些活性氧可直接作用于一些细胞包括免疫细胞,与其脂质、蛋白质、核酸等发生反应,引起脂质过氧化,使mda增多,造成细胞毒性和功能受损。mda的增多会造成自由基连锁反应加强,使炎症加重或发展。经tspt治疗后,大鼠炎性组织中mda的含量降低,表明tspt能抑制或阻断炎症时氧自由基的过量产生与释放,减轻氧化应激反应与脂质过氧化,使其终产物mda降低,并接近正常组水平,因而减少了对细胞的损伤,纠正体内氧自由基代谢失衡或紊乱的作用,调整机体内环境,起到消炎、抗氧化和细胞保护作用,促进了炎症反应的消退。tspt抗炎免疫的作用机理是多方面的,本实验结果提示,tspt对aa大鼠炎症时氧自由基代谢的调整作用,可能是其中一个重要环节,对aa大鼠的抗关节炎作用可能与其降低脂质过氧化,恢复抗氧化酶活性和腹腔mφ分泌功能等有关。
【参考文献】
1 包骏,冉懋雄. 贵州苗族医药研究与开发. 贵阳:贵州科技出版社,1999,174.
2 中华本草编委会. 中华本草. 第二卷.上海:上海技术出版社, 1999,782.
3 莫简.关于自由基在体系中作用的几点看法.第四军医大学学报,1997,18(2):199.
【关键词】 金铁锁总皂苷 佐剂性关节炎 mda
【abstract】 objective to observe the anti-inflammation effects and possible mechanism of total saponins of psammosilene tunicoids (tspt) .methods after establishing aa rats model, the tspt's anti-inflammatory effects and mechanism against aa was studied through observing changes of the ankle swelling and contents of mda in inflammatory-tissue soak of aa rats.results tspt could inhibit articular swelling and effectively decrease the content of mda in inflammatory tissue soak of aa rats.conclusion tspt has good anti-inflammation effects and the mechanism is likely related to tspt's down-regulation of mda.
【key words】 tspt aa mda
金铁锁(苗语:jenb tieeg sox)系苗族习用药材,首载于《滇南本草》,为石竹科植物金铁锁psammosilene tunicoides.w.c.wu et c.y.wu的干燥根。别名:独定子、对叶七、白马分鬃等,主要含皂苷类成分。具有散瘀定痛、止血、消痈排脓之功,用于跌打损伤,风湿痛、胃痛、创伤出血等的治疗。目前尚关于其抗aa研究的文献报道,本文就关于金铁锁总皂苷抗aa作用的研究作一介绍。
1 材料与方法
1.1 材料 freund's完全佐剂(sigma公司产品,由帮定技术公司提供),注射器(1.0ml),金铁锁总皂苷(贵阳中医学院制剂教研室提取),地塞米松注射液(批号:0206101,天津金辉氨基酸有限公司提供),风湿宁注射液(批号504002,罗浮山药业提供),tspt(贵阳中医学院制剂教研室提取)。
动物:70只雄性wistar大鼠,体重:(200±30)g,清洁级二级动物(由军事医学院动物中心提供)。
1.2 实验方法
1.2.1 分组 70只wistar雄性大鼠,随机分为7个组。分别为:生理盐水组(ns)、模型组(a)、西药阳性对照组(地塞米松注射液)(b)、中药阳性对照组(风湿宁注射液)(c)、tspt大(d)、中(e)、小(f)剂量组。
1.2.2 造模 除ns组外,其余各组于每只大鼠右后足跖皮内注射freund's完全佐剂0.1ml致炎。第1天记录大鼠的体重和两侧脚踝关节的周长。
1.2.3 给药 除ns组外,其余均按上述方法造模,于造模后第9天开始给药,连续给药12天。每隔3天,记录各组大鼠体重,及踝关节肿胀,末次给药(造模后第21天)1h后处死大鼠,观察药物对继发性病变的影响。
2 结果
2.1 tspt 对aa大鼠足肿胀的影响 足肿胀的测量方法:用记号笔标记肿胀踝关节周径,每日以特制软皮尺测量踝关节周长(软皮尺无弹性,最小刻度为0.1cm)。实验结果见表1。
统计结果分析:实验结果表明,与生理盐水比较,造模后第8天(药前)各组足均明显肿胀(p<0.01),表明造模成功。用药约1周后,tspt大、中剂量对足肿胀均显示出明显的抑制作用(p<0.01),作用强度大于中药阳性组(风湿宁注射液),接近地塞米松组。提示:tspt能有效抑制aa大鼠踝关节的炎症反应。
2.2 大鼠致炎足中丙二醛(mda)生成量的测定 动物造模分组给药同上。鼠致炎21天后处死,在致炎侧关节上方0.5cm处摘取肿胀足爪,纵向切开,放入5ml生理盐水的试管中4 ℃浸泡过夜,离心(3000r/min)取上清液,-20℃保存待测。
试剂与仪器:mda试剂盒(由北京帮定技术公司提供),可见分光光度计(岛津:fw/uv265)(由北京武警总医院制剂科提供)、恒温水浴锅、离心机(由北京武警总医院检验科提供)。
测定方法及参数:硫代巴比妥酸结合法,于532nm处测定,实验操作方法严格按照试剂盒说明进行。
2.3 统计学方法 实验结果以(x±s)表示,采用t检验。如表2。
表1 tspt对aa大鼠足肿胀的影响 (n=10, x±s)
注:与ns组比较:***p<0.01;与模型组(a组)比较:★★p<0.05,★★★p<0.01;与西阳组比较(b):△△p<0.05,△△△p<0.01。与中阳(c)组比较:※※p<0.05,※※※p<0.01
表2 tspt对aa大鼠炎性组织液中mda的影响 (n=6,x±s)
注:与ns组比较:**p<0.05;***p<0.01; 与模型组(a)比较:★★p<0.05,★★★p<0.01; 与西阳组比较(b):△△p<0.05,△△△p<0.01;与中阳组比较:※※p<0.05
图1 tspt对mda水平的影响图
由图表统计分析可知:与ns组比较,模型组炎性组织液中,mda的含量显着升高(p<0.01),这显示出aa大鼠出现严重的炎性反应。经治疗后,与模型组比较,各个给药组aa大鼠炎性组织液中mda含量均有不同程度的降低,b(西阳组)、d(tspt大剂量组)表现出差异有非常显着性(p<0.01)。
3 讨论
mda通过酶系统和非酶系统产生氧自由基,自由基可引起脂质过氧化,影响一些基因的表达,在炎症和免疫过程中起着中介作用。因此自由基在体系中的作用正受到广泛重视。在正常情况下,机体内仅产生少量氧自由基,其产生、利用和清除保持一种动态平衡。一旦由于某种原因造成体内自由基的堆积,便会损伤组织细胞,导致各种病理变化。
aa大鼠炎症反应中,模型对照组炎性组织液中mda含量显着升高与aa大鼠足肿胀呈正相关,表明致炎因子使机体产生过量的氧自由基。这些活性氧可直接作用于一些细胞包括免疫细胞,与其脂质、蛋白质、核酸等发生反应,引起脂质过氧化,使mda增多,造成细胞毒性和功能受损。mda的增多会造成自由基连锁反应加强,使炎症加重或发展。经tspt治疗后,大鼠炎性组织中mda的含量降低,表明tspt能抑制或阻断炎症时氧自由基的过量产生与释放,减轻氧化应激反应与脂质过氧化,使其终产物mda降低,并接近正常组水平,因而减少了对细胞的损伤,纠正体内氧自由基代谢失衡或紊乱的作用,调整机体内环境,起到消炎、抗氧化和细胞保护作用,促进了炎症反应的消退。tspt抗炎免疫的作用机理是多方面的,本实验结果提示,tspt对aa大鼠炎症时氧自由基代谢的调整作用,可能是其中一个重要环节,对aa大鼠的抗关节炎作用可能与其降低脂质过氧化,恢复抗氧化酶活性和腹腔mφ分泌功能等有关。
【参考文献】
1 包骏,冉懋雄. 贵州苗族医药研究与开发. 贵阳:贵州科技出版社,1999,174.
2 中华本草编委会. 中华本草. 第二卷.上海:上海技术出版社, 1999,782.
3 莫简.关于自由基在体系中作用的几点看法.第四军医大学学报,1997,18(2):199.